無論是保存還是運輸,請避免反復凍融。反復凍融,冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結構,導致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構象改變,從而降低抗體的結合能力,也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度。抗體和重組蛋白保存得當與否,直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果,如果保存得當,抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持數年。
我們進入實驗室要穿好工作服,不要存僥幸心里,如果一不小心碰到酸,心愛的衣服燒個洞是小事,燒傷皮膚就麻煩了。不要嫌麻煩,一定要戴手套才做對身體有危害的實驗,要對自己的身體負責。
紫外線消毒:在室溫20℃~25℃時,220V 30W紫外燈下方垂直位置1.0m處的253.7mm紫外線輻射強度應≥70uW/cm2,低于此值時應更換。適當數量的紫外燈,確保平均每立方米應不少于1.5W。
質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA 片段( <10kb) 且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆,從原理上說是很簡單的,先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段,然后體外使兩者相連接,再用所得到重組質粒轉化細菌,即可完成。但在實際工作中,如何區分插入有外源DNA 的重組質粒和無插入而自身環化的載體分子是較為困難的。
血清并不是生來就為養細胞而來的。血清是全血的一部分,組分很復雜,有 150 多種已知組分組分,多種未知組分。這些組分中,有些對細胞生長是有利的,有些對細胞生長是無作用的,有些對細胞生長反而是有害的。
微生物的培養基通常指人工配制的適合微生物生長繁殖,或積累代謝產物的營養基質。廣義上說,凡是支持微生物生長繁殖的介質或材料,均可作為微生物的培養基。一個適當的培養基配方,對發酵產品的產量和質量有著極大的影響。
瞬時轉染:外源片段的表達時間短暫。這主要是因為外源導入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低,所以以染色體外(episomal)形式存在,不能隨細胞分裂而一同復制導致最后拷貝數被稀釋導致的。而且考慮到細胞分裂會稀釋質粒的量,所以起初轉染的質粒拷貝數極高。這就導致瞬時轉染呈現一個高拷貝到低拷貝迅速降低的過程,且無法在這個系統上實現可誘導表達。
在western blot 過程中,分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細節,然而就是這樣一個小細節對實驗結果有著不可忽視的作用。這個 Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小,只有標準量精確無誤了,實驗結果才有說服力,除此之外,蛋白標準還有表示轉移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用,所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實驗成功的必要條件之一。