醋酸鹽緩沖液(pH3.5)取醋酸銨25g,加水25ml溶解后,加7mol/L鹽酸溶液38ml,用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準確調節PH值至3.5(電位滴定法),用水稀釋至100ml,即得。
細胞凋亡通常稱為細胞程序性死亡,是由基因控制的主動性細胞死亡過程。越來越多數據發現,細胞凋亡與多種疾病密切相關,如癌細胞具有連續增殖、抵抗細胞凋亡能力,利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫瘤診斷,療效評價和預后預測提供了重要的參考指標。
分離質粒 DNA 與提取 RNA 或基因組 DNA 的提取方式是不相同的,因為必須質粒與基因組 DNA 必須分離。如果此刻,您加入離液劑將立即釋放所有物質,并且無法將小環狀 DNA 與高分子量染色體區別開來。因此,在質粒制備過程中中,直到裂解后才加入離液劑,鹽用于結合。
本實驗用簡易過碘酸鈉法進行HRP標記抗體。本法是以NaIO4先將HRP表面的糖分子氧化成醛基,然后再與Ig上的氨基相結合,所獲酶標記抗體的產率高,將近70%的HRP和Ig結合,99%的Ig與酶結合,酶與Ig的活性無重大損失,是目前最常用的方法。
當FITC在堿性溶液中與抗體蛋白反應時,主要是蛋白質上賴氨酸的r氨基與熒光素的硫碳胺鍵(thiocarbmide)結合,形成FITC-蛋白質結合物,即熒光抗體或熒光結合物。一個IgG分子中有86個賴氨酸殘基,一般zui多能結合15~20個,一個IgG分子可結合2~8個分子的FITC
熒光色素是最常用于標記抗體的標記物之一。熒光素經恰當的激發可發光,從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況,主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色,是一種非常好的亞細胞水平精確定位的方法。