核糖核酸酶A(RNase A)來源于牛胰臟,是一種內切核糖核酸酶,可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵,反應終產物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無輔助因子及二價陽離子存在時,核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑(RNasin)或氧釩一核糖核苷復合物(vanadyl—ribonuclosidecomplex,VRC)所抑制。RNase A的反應條件極廣,且極難失活。在低鹽濃度(0~100 mmol/l NaCl)下,RNase A切割單鏈和雙鏈RNA、DNA:RNA雜交體中的RNA;當NaCl濃度為300 mmol/l。或更高時,RNase A就特異性切割單鏈RNA。去除反應液中的RNase A,通常需要蛋白酶K處理、酚反復抽提和乙醇沉淀。
pH緩沖液是確保pH測量值精確的重要因素。標準緩沖液用于校準pH 傳感器和檢查其性能。pH緩沖液的緩沖能力是其重要的屬性。即使將外部物質加入緩沖液中,這一屬性仍可使pH緩沖液保持恒定的pH值。
標準物質(RM)reference material(RM):是一種已經確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質或材料,作為分析測量行業中的"量具",在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質或材料特性值和考核分析人員的操作技術水平,以及在生產過程中產品的質量控制等領域起著不可或缺的作用。
如果你的質粒正好比較大,又沒有經驗,選擇特別注明可以轉大質粒的轉染試劑成功幾率會高一些。有的轉染試劑還會提供一些促進DNA凝聚的成分,使得DNA形成轉染復合物時更致密一些,更容易轉染一些。純化質粒的質量也會影響轉染效率,一定要選擇高質量的質粒。
Trizol試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中,Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后離心,樣品能分成水樣層和有機層。而RNA存在于水樣層中。在收集上面的水樣層后,RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原。在除去水樣層之后,樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA,在有機層中加入異丙醇能析出有機層的蛋白。
生成沉淀法。例如NaCl 溶液里混有少量的MgCl2 雜質,可加入過量的NaOH 溶液,使Mg2+離子轉化為Mg(OH)2 沉淀(但引入新的雜質OH–),過濾除去Mg(OH)