甘油保存菌種的基本要求
1.20%甘油保存菌種是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u滅菌l甘油后的甘油后,充分混勻后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)
2.將一般細(xì)菌的菌種純化后接種于普通肉湯管，4～6h增菌后，加入適量甘油一生理鹽水保存液，-20℃冰箱保存；鏈球菌屬和奈瑟氏菌屬的菌株純化后接種于血清肉湯管，在5％～10％CO2中經(jīng)8～10h增菌后，加入適量保存液，80℃低溫冰箱保存；真菌菌種純化后直接取菌洗入肉湯，不做培養(yǎng)，加入保存液后，-20℃冰箱保存。結(jié)果在連續(xù)3年實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，各菌種保存效果良好，且其形態(tài)結(jié)構(gòu)、染色特性、生化反應(yīng)等與標(biāo)準(zhǔn)株相符。結(jié)論使用甘油生理鹽水保存法來保存菌種，各菌種保存時(shí)間長，方法簡便，特別是使鏈球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般實(shí)驗(yàn)室得以保存。
3.常用的是終濃度10-30%的甘油。由于純甘油十分粘稠，很難定量，一般配成終濃度50%的水溶液，高壓滅菌后室溫保存即可。使用時(shí)按50%甘油:菌液=1:1混合均勻，然后迅速凍結(jié)。
A.先把甘油稀釋成50%，然后滅菌這樣20%的終濃度用400微的菌體加600微的50%甘油混合不就可以啦純的甘油太粘稠啦，用槍不好吸的
B終濃度15%。甘油配成80%的濃度，到時(shí)候加800微升菌體，200微升甘油就好。簡單的就在原來的培養(yǎng)基，如LB，或生理鹽水中加甘油，終濃度在20%左右，懸浮沉淀后裝小管扔冰箱凍起來就可以了。但時(shí)間不能太長，不要超過2~3個(gè)月，時(shí)間長了要重新活化、篩選。
甘油和水是互溶的，根本不是什么密封作用！甘油是為了防止冷凍結(jié)晶破壞細(xì)胞
甘油管保藏的菌種可以通過以下步驟復(fù)壯：
1. 將無菌操作臺(tái)滅菌30min后，用75％酒精棉球消毒包括手在內(nèi)的所有物品。
2. 使用滅菌接種環(huán)扣取甘油管中的冷凍菌塊，放入3mlLB液體培養(yǎng)基中。
3. 在37℃、150rpm的條件下過夜培養(yǎng)。
4. 將過夜菌液重新按照步驟2和步驟3活化一次，經(jīng)過2次活化的菌液即可用于實(shí)驗(yàn)。
請注意，操作過程應(yīng)適當(dāng)快一些以減少凍存管內(nèi)的融化，并且應(yīng)提前準(zhǔn)備好所有物品，再從冰箱中取出保藏菌種。
