反轉錄PCR/熒光定量PCR
RT-PCR/Real time-PCR
RT-PCR 是將 RNA 的反轉錄(RT)和 cDNA 的擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從 RNA 合成 cDNA,再以 cDNA 為模板,擴增合成目的片段。熒光定量 PCR 是指在 PCR 反應體系中加入熒光基團(如 SYBR 熒光染料),利用熒光信號積累實時監測整個 PCR 進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
服務流程
1. 從樣本中提取總 RNA
2. 引物/探針設計及合成
3. 合成 cDNA 第一鏈
4. 以 cDNA 為模版,分別擴增目的基因和內參基因
5. 定性:PCR 產物的凝膠電泳和差異分析
熒光定量:構建標準品的標準曲線,溶解曲線,擴增曲線,計算各樣本的拷貝數。
備注:請提供足夠量的樣品(100mg 組織塊或 107 個細胞或 0.5ml 血清),動物組織、植物組織等取樣后需液氮速凍;細菌、細胞樣品需新鮮培養。
提供結果
1. 總 RNA 的質量(電泳圖片 28S/18S ,A260/A280)
2. 定性:PCR 產物電泳圖片,半定量結果分析
定量:目的基因和內參基因的溶解曲線圖、擴增曲線圖,ct 值,相對表達量
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