稱重：
根據培養基配方的比例，將牛肉提取物，蛋白胨和NaCl準確稱入燒杯中。牛肉醬通常用玻璃棒挑出，在小燒杯或觀察杯中稱重，溶于熱水，然后倒入燒杯中。也可以將其放在稱量紙上，稱量后直接放入水中。此時，如果將其稍加加熱，牛肉糊將與稱量紙分離，然后立即將紙頁移開。蛋白胨吸濕性強，稱重時移動迅速。另外，在混合藥物時，應嚴格防止藥物混合。羊角面包用于一種藥物，或在服用一種藥物后，將其洗滌并干燥，然后稱重另一種藥物。不要在瓶子上蓋錯蓋子。
融化：
在上述燒杯中，可以先添加少于所需量的水，用玻璃棒充分攪拌，然后在石棉網上加熱使其溶解。藥物完全溶解后，加水至所需總體積。如果準備了固體培養基，則將稱量的瓊脂放入溶解的藥物中，然后加熱使其溶解。在瓊脂溶解過程中，需要攪拌以防止瓊脂糊破壞燒杯。最后補上丟失的水。
PH調整：
在調節pH值之前，首先要用精密pH試紙測量培養基的原始pH值。如果pH呈酸性，則用滴管將1mol / L NaOH滴加到培養基中，邊攪拌邊添加，并隨時用pH試紙測量其pH值直至pH達到7.6。否則，請使用1mol / L HCl進行調整。請注意，不應將pH值調節得太遠，以免發生回調，否則會影響介質中離子的濃度。
對于某些需要更準確pH值的微生物，可以使用酸度計調節pH值（有關用法，請參閱相關說明）。
過濾器：
趁熱時，用濾紙或多層紗布過濾以利于觀察結果。如果沒有特殊要求，則可以省略此步驟（此實驗中無需過濾）。
包裝：
根據實驗要求，所制備的培養基可以分為試管或錐形瓶。
在填充過程中，請注意不要讓培養基粘附在試管或瓶子的嘴上，以免污染棉塞并造成污染。
（1）液體包裝和包裝的高度優選為試管的高度的約1/4。
（2）用于固體分裝和分裝的試管不得超過試管高度的1/5。滅菌后，應將其制成斜坡。分開的錐形瓶的體積不應超過錐形瓶的一半。
（3）半固體分裝試管通常適合試管高度的1/3，并在滅菌后垂直凝結。
加塞：
填充培養基后，將棉塞放在試管或三角瓶的嘴上，以防止外部微生物進入培養基并造成污染，并確保良好的通風性能（將棉塞的方法固定在背面此實驗）。
繃帶：
堵塞后，將所有試管用麻繩綁起來，然后在衛生棉條上纏上一層牛皮紙，以防止滅菌過程中的冷凝水弄濕衛生棉條。使用標記指示介質名稱，組和日期。塞子裝滿牛皮紙后，用麻繩將繩子包裹成松散的結。使用時很容易解開它。另外，使用標記指示介質名稱，組和日期。
殺菌：
通過在121.3℃下以1.05kg / cm 2（15lb / in 2）高壓滅菌20分鐘，將上述培養基滅菌。如果由于特殊情況不能及時消毒，應將其放在冰箱中暫時存放。
擱置斜面：
將滅菌后的試管培養基冷卻至約50℃，將試管的棉塞端置于玻璃棒上，傾斜面的長度優選為試驗總長度的一半以下。
無菌檢查：
將滅菌后的培養基放入37℃的溫室中24-48小時，以檢查滅菌是否完成。
